一、基本信息
产品编号:69504 (50次)/69506(250次)
规格:提供50次、250次预处理规格,以及96孔板高通量格式和适用于QIAcube自动化仪器的专用试剂盒。
技术原理:基于硅胶膜离心柱技术,无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。
二、产品应用
本试剂盒专为从多种动物来源样本中快速纯化总DNA(包括基因组DNA、线粒体DNA和病原体DNA)而设计。纯化的高质量DNA适用于各种下游分子生物学应用:
△ 生命科学研究 (Life Science Research)
△ 基因分型 (Genotyping),如牲畜育种、谱系鉴定
△ 兽医病原体研究 (Veterinary Pathogen Research)
△ 常规检测 (Routine Applied Testing)
△ PCR、实时荧光定量PCR (qPCR)、多重PCR
△ 下一代测序 (NGS) 和 数字PCR (dPCR)
三、产品优势
✅ 样本类型极其广泛:可处理新鲜或冷冻的动物组织(肝、脑、肾、脾、尾、耳等)、血液(哺乳动物、鸟类)、培养细胞、细菌(革兰氏阳性和阴性)、酵母、病毒、昆虫甚至毛发、指甲等困难样本。
✅ 高质量与高得率:纯化的DNA无蛋白质、核酸酶和PCR抑制剂,A260/A280比值理想,可直接用于敏感的下游应用。典型得率见下表:
样本来源 | 样本量 | DNA得率 (µg) |
哺乳动物血液 | 100 µl | 3–6 |
鸟类血液 | 5 µl | 9–40 |
HeLa细胞 | 2 x 10⁶ 个细胞 | 15–25 |
肝脏/脑/肾脏组织 | 25 mg | 10–30 |
脾脏组织 | 10 mg | 5–30 |
小鼠尾尖 | 1.2 cm | 10–25 |
大鼠尾尖 | 0.6 cm | 20–40 |
马毛 | 10根 | 2–4 |
✅ 操作简便快捷:优化的标准流程和针对特定样本的补充方案,大多数样本通过蛋白酶K直接裂解,无需机械破碎,减少了手动操作时间。整个流程约需20分钟至1小时。
✅ 灵活且可扩展:提供离心柱(手动)和96孔板(高通量)两种格式。离心柱流程可在QIAcube Connect仪器上实现全自动化。
✅ 安全环保:流程无需使用有毒的苯酚或氯仿。此外,QIAGEN提供更环保的替代产品QIAwave DNA Blood & Tissue Kit,可减少高达62%的塑料和58%的纸板使用。
四、使用说明(流程概要)
1. 裂解:将样本(最多25 mg组织或200 µl血液)与蛋白酶K和Buffer ATL混合,在56°C下孵育直至完全裂解(必要时可过夜)。
2. 调整结合条件:向裂解液中加入Buffer AL和乙醇,混合均匀。
3. 结合:将混合液转移至DNeasy Mini离心柱中,≥6000 x g离心1分钟。DNA被特异性捕获在硅胶膜上,污染物穿透。
4. 洗涤:加入Buffer AW1,离心1分钟,弃滤液。加入Buffer AW2,离心3分钟,弃滤液。此步骤彻底去除残留的杂质和酶抑制剂。
5. 洗脱:将离心柱置于一个新的1.5 ml收集管中,向膜中央加入100-200 µl Buffer AE或无菌水,室温静置1分钟,离心1分钟洗脱高质量DNA。
五、注意事项
1. 储存条件:试剂盒室温(15-25°C)储存。但蛋白酶K建议冷藏(2-8°C)以延长保质期。
2. 生物安全:处理可能含有病原体的样本时,应遵守实验室安全规程。流程中的裂解液含有胍盐,可部分灭活病原体,但废弃液仍需根据当地规定作为生物危害废物处理。切勿在废液中直接加入漂白剂,以免产生有毒气体。
3. 样本量:切勿超过推荐的最大样本量,否则可能导致裂解不彻底、堵塞柱子或残留抑制剂。
4. 乙醇:Buffer AW1和AW2在使用前需按说明书要求加入无水乙醇。
5. 应用范围:本产品仅供科研使用,不适用于临床诊断。
6. 疑难样本:对于骨骼、肌腱等非常坚韧的组织,建议先进行机械性粉碎(如用液氮研磨或使用QIAGEN TissueLyser),再使用延长蛋白酶K消化时间的方案。
六、相关产品推荐
1. QIAwave DNA Blood & Tissue Kit:更环保的替代选择,性能与DNeasy试剂盒完全相同,但大幅减少了塑料和包装浪费。
2. DNeasy 96 Blood & Tissue Kit:适用于96孔板格式的高通量DNA提取,可同时处理96或192个样本。
3. DNeasy Blood & Tissue QIAcube Kit:专为在QIAcube Connect自动化工作站上使用而设计。
4. QIAamp DNA Mini Kit:另一款经典的基因组DNA提取试剂盒,特别适用于小体积样本和病毒DNA提取。
5. TissueLyser:QIAGEN的组织匀浆仪,可高效破碎坚韧的组织样本,与本品配套使用效果更佳。