ELISA（酶联免疫吸附测定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种广泛应用于生物学和医学研究的高灵敏度免疫学检测技术，用于检测抗原、抗体或其他生物分子。

一、ELISA的基本原理

ELISA利用抗原与抗体的特异性结合，通过酶标记的二抗或抗原与底物反应产生可检测的信号（如颜色变化），从而定量或定性分析目标分子。

实验时，需要将抗原或捕获抗体包被于固相载体上，通过检测分子（酶或荧光基团），将化学信号转换为电信号，以OD值或发光值的结果，对靶蛋白进行定量分析。

图1 ELISA实验基本原理（双抗夹心法）

二、ELISA分类

ELISA（酶联免疫吸附测定）根据实验设计和检测目标的不同，主要分为四类：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA。

1.直接ELISA

直接ELISA是用于检测抗原最简单的一种方法。将抗原直接固定在微孔板上，加入酶标记的一抗，一抗与抗原结合后，加入底物显色。

2.间接ELISA

将抗原固定在微孔板上，加入一抗，再加入酶标记的二抗（针对一抗的抗体），最后加入底物显色。 

3.夹心ELISA

夹心ELISA法可分为双抗体夹心法和双抗原夹心法。

双抗体夹心法：使用两种抗体，一种作为捕获抗体固定在固相载体上，另一种作为检测抗体（通常带有酶标记）。待测抗原与捕获抗体结合后，再与酶标检测抗体结合，最后通过底物显色。

双抗原夹心法：使用两种抗原，一种作为捕获抗原固定在固相载体上，另一种作为检测抗原（通常带有酶标记）。待测抗体与捕获抗原结合后，再与酶标检测抗原结合，最后通过底物显色。 

4.竞争ELISA

参照抗原包被在微孔板孔底。将样品和抗体加入孔中，如果样品中存在抗原，则它会与参照抗原竞争结合抗体。洗掉没有结合的物质，样品中的抗原越多，最终孔底结合的参照抗原的抗体就越少，信号就越弱。 

三、ELISA操作步骤（以双抗夹心法为例）

1.包被：将捕获抗体固定在微孔板上。

2.封闭：用封闭剂（如BSA）封闭非特异性结合位点。

3.加样：加入待测样本，抗原与捕获抗体结合。

4.洗涤：去除未结合的抗原。

5.加检测抗体：加入酶标记的检测抗体，与抗原的另一表位结合。

6.洗涤：去除未结合的检测抗体。

7.显色：加入底物，酶催化反应产生颜色。

8.终止反应：加入终止液停止反应。

9.检测：用酶标仪测定吸光度，定量分析抗原浓度。

四、ELISA方法的比较

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