免疫共沉淀（Co-IP）是研究蛋白质相互作用的经典技术。本文从免疫共沉淀技术原理出发，系统梳理免疫共沉淀实验流程及免疫共沉淀操作步骤，帮助实验人员获得可靠结果。

一、免疫共沉淀技术原理

免疫共沉淀技术原理基于抗原与抗体的特异性结合。在非变性裂解条件下，目标蛋白（诱饵蛋白）与互作蛋白保持天然结合状态。加入特异性抗体后，抗体结合诱饵蛋白，再通过Protein A/G琼脂糖珠捕获抗体Fc段，形成三元复合体并沉淀。洗涤去除非特异性吸附后，通过Western Blot或质谱鉴定共沉淀的互作蛋白。

Co-IP的核心优势在于可在内源性蛋白水平、接近生理条件下研究互作，无需标记或修饰蛋白。

二、免疫共沉淀实验流程

完整的免疫共沉淀实验流程包含以下环节：

1. 样本裂解：收集细胞，PBS洗涤后加入含蛋白酶抑制剂的预冷裂解液，冰上裂解30分钟。4℃离心15分钟取上清，留取5%作为Input对照。

2. 预清除：加入无关IgG与Protein A/G珠，4℃旋转孵育30分钟后离心取上清，降低背景。

3. 抗体孵育：加入特异性抗体（实验组）或同种属IgG（阴性对照），4℃旋转过夜。

4. 复合物捕获：加入Protein A/G珠，4℃旋转孵育2-4小时。

5. 洗涤：离心收集珠子，预冷裂解液洗涤3-4次。

6. 洗脱检测：加入SDS上样缓冲液，100℃加热5—10分钟，离心取上清进行Western Blot。

三、免疫共沉淀操作步骤关键要点

免疫共沉淀操作步骤中须注意：裂解液应温和，避免高浓度SDS破坏互作；全程冰上操作并添加蛋白酶抑制剂；优先使用IP级单克隆抗体；须设IgG阴性对照排除非特异性结合；IP与WB抗体应选不同种属来源，避免轻重链干扰。

规范的免疫共沉淀实验流程是验证蛋白互作可靠性的保障。北京百奥创新可提供各类免疫共沉淀相关试剂，包括IP级抗体、Protein A/G琼脂糖珠、IP裂解液、蛋白酶抑制剂及WB检测试剂等，品质稳定。如有需求，欢迎联系咨询。