一、基本信息

产品编号：TD419-25

核心特点：快速、高纯度、低内毒素、操作简便

产品描述：本试剂盒适用于从50ml细菌培养物中快速提取高纯度、低内毒素的质粒DNA，采用优化的裂解与中和体系结合硅胶膜纯化技术，无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂，可在约25分钟内完成提取，所得质粒可直接用于多种敏感的分子生物学下游应用。

二、产品应用

零内毒素质粒快速中量提取试剂盒提取的质粒DNA适用于多种分子生物学实验。

△酶切与连接：为限制性内切酶消化和连接反应提供高纯度模板。

△转化与转染：获得的低内毒素质粒适用于细菌转化及真核细胞转染。

△PCR扩增：可作为高保真PCR反应的优质模板。

△体外转录：满足对RNA转录模板的纯度要求。

△核酸测序：提供符合Sanger测序或二代测序要求的DNA样本。

△体内实验：低内毒素特性使其适用于动物体内等敏感实验。

三、产品优势

✅高纯度：提取的质粒DNA A260/A280比值通常≥1.8，A260/A230比值约为2.0，杂质残留少。

✅低内毒素：内毒素含量严格控制在≤0.1 EU/µg，满足细胞转染和体内实验的严格要求。

✅高产量：单次提取可获得约100-300 µg的质粒DNA，产量取决于质粒拷贝数与菌体培养状态。

✅快速高效：整个操作流程可在25分钟内完成，无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。

✅安全性高：不使用有毒有机溶剂，实验过程更为安全环保。

✅可视化监控：独特的裂解中和指示系统，便于操作者直观判断反应进程。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 菌体收集：取50ml OD600≤5的菌液，离心弃上清，收集细菌沉淀。

2. 重悬裂解：使用溶液P1充分重悬菌体，加入溶液P2温和混匀以裂解细胞。

3. 中和沉淀：加入预冷的溶液P3中和裂解液，直至出现白色絮状沉淀，离心收集上清。

4. 澄清过滤：通过注射器滤器装置去除沉淀，收集澄清的裂解液。

5. 沉淀调节：向澄清裂解液中加入适量预冷异丙醇，混匀以调节DNA结合条件。

6. 结合洗涤：将混合物上样至纯化柱，依次使用洗涤液1和洗涤液2洗涤硅胶膜。

7. 洗脱收集：空离去除残留乙醇后，使用预热的洗脱液将质粒DNA洗脱至离心管中。

五、注意事项

1. 试剂储存：溶液P1加入RNase A后需于4℃保存；溶液P2应室温避光保存，低温沉淀时可于37℃水浴加热恢复澄清。

2. 菌液要求：用于提取的菌液OD600值建议不超过5，以确保裂解充分并控制内毒素水平。

3. 溶液配制：首次使用前，需将提供的RNase A全部加入溶液P1中；质粒DNA洗涤液2使用前必须按比例加入指定体积的无水乙醇。

4. 操作规范：裂解与中和步骤需温和混匀，避免剧烈振荡导致基因组DNA污染或剪切。

5. 安全防护：操作时应佩戴手套、护目镜等个人防护装备，并在通风良好的环境下进行。

6. 洗脱优化：为获得更高得率，建议将质粒DNA洗脱液预热至65-70℃后再进行洗脱步骤。

六、相关产品推荐

1. 质粒小量提取试剂盒（货号：TD428）：用于从1-3ml细菌培养物中快速提取质粒DNA，适用于克隆筛选与鉴定。

2. 质粒中量提取试剂盒（货号：TD420）：适用于从50ml细菌培养物中提取质粒DNA，平衡产量与时间成本。

3. 通用基因组DNA小量提取试剂盒（货号：TD468）：用于从细菌、动物组织或细胞中高效提取高分子量基因组DNA。