一、基本信息

产品货号：AG11728

产品规格：100 rxns / 20 μl

产品描述：本产品是一款基于M-MLV反转录酶的反转录预混试剂盒，专为实时荧光定量PCR（qPCR）应用设计。试剂盒核心包含优化的5X反转录预混液，可有效合成cDNA，并配有独立的基因组DNA去除预混液，以消除gDNA残留对定量结果的干扰。其cDNA产物兼容SYBR Green染料法和探针法qPCR检测，适用于高效的基因表达分析。该试剂盒提供两步法和All-in-One两种操作流程，可根据实验需求灵活选择。

二、产品应用

本试剂盒适用于从RNA模板合成cDNA，用于后续的实时荧光定量PCR分析。

△基因表达定量分析：通过反转录获得cDNA，用于SYBR Green或探针法qPCR，精确检测目标基因的表达水平。

△基因组DNA残留控制：利用试剂盒内的gDNA去除组分，有效消除RNA样本中残留的基因组DNA，确保qPCR定量的特异性与准确性。

△实验对照设置：使用配套的NRT Control Reaction Mix，可便捷地设置无反转录酶的阴性对照，用于评估gDNA去除效果及背景信号。

三、产品优势

✅集成gDNA去除：试剂盒包含独立的gDNA Clean Reaction Mix，可快速、高效地降解RNA样本中混杂的基因组DNA，从源头保障qPCR数据的准确性。

✅预混液设计：基因组去除与反转录所需的关键试剂均已预混，简化操作步骤，减少移液误差和试剂损失，提升实验重复性。

✅流程灵活可选：支持经典的两步法（先去除gDNA，再进行反转录）和便捷的All-in-One法（去除与反转录在同一反应管内进行），用户可根据RNA样本质量和实验通量灵活选择。

✅广泛qPCR兼容：经优化的反转录体系产生的cDNA产物，可同时适用于基于SYBR Green I染料和特异性荧光探针的qPCR检测方法，应用范围广。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 方法选择：根据实验设计，确定采用两步法或All-in-One法进行后续操作。

2. 反应体系配制：在冰上使用无核酸酶耗材，按照推荐比例混合RNA模板、相应预混液及无核酸酶水。

3. gDNA去除：若采用两步法，先进行gDNA去除反应；若采用All-in-One法，此步骤与反转录合并。

4. 反转录反应：将反应体系置于PCR仪或水浴中，按照设定的温度和时间程序进行cDNA合成。

5. 产物处理：反应结束后，可将cDNA产物直接用于后续qPCR，或于-20℃短期保存。

五、注意事项

1. RNA样本质量：确保输入RNA的完整性与高纯度，并严格在无RNase污染的环境下操作，以防止模板降解。

2. 试剂处理：各预混液因甘油浓度较高，使用前需短暂离心并轻柔涡旋混匀，以确保组分均一。

3. 反应配制：建议所有反应混合液在冰上配制，以维持酶活性并防止非特异性反应。

4. 产物应用：本产品合成的cDNA产物专为qPCR分析优化，不建议用于长片段基因的克隆或扩增，也不推荐使用紫外分光光度法测定其浓度。

5. 方法选择：需根据来源RNA中基因组DNA的残留水平及实验对背景控制的要求，选择合适的反转录操作方法。

六、相关产品推荐

1. Evo Super M-MLV 一步法 RT-PCR 预混液（含染料）（货号：AG11625）：以 RNA 为模板进行一步法 RT-PCR 的试剂盒，操作简便、快捷，反应过程中不需要再添加任何试剂，可有效降低污染风险。

2. Evo Super M-MLV 反转录聚合酶 II（货号：CM0266）：基于 M-MLV (莫洛尼鼠白血病病毒)进行基因改造的逆转录酶突变体，合成效率高、反应速度快、灵敏度高、热稳定性好。

3. Evo M-MLV III 反转录聚合酶（货号：AG11617）：具有较强的 cDNA 延伸能力及稳定性，同时具有较高的灵敏度，对具有复杂二级结构的 RNA 模板的反转录也能有很好的扩增效果。