细胞侵袭是细胞迁移的一种，是指细胞在原位突破基底膜，然后内渗进入血管、淋巴管的过程，即入侵的细胞（如恶性肿瘤细胞）穿过胞外基质层（ECM）或基底膜基质层（BME）从一个区域侵入到另一个区域，在侵袭到新区域之前，ECM/BME被细胞内的蛋白酶降解。细胞侵袭实验通常用于评估细胞在模拟体内环境下的侵袭能力，特别是在肿瘤学研究中。常见的细胞侵袭实验包括基于基质胶（Matrigel）的小孔板侵袭实验和Boyden小室法，这些方法通过模拟细胞穿越基底膜或其他屏障的过程，来评估细胞的侵袭能力。

本文主要介绍基于Matrigel的小孔板侵袭实验方法：

（一）准备细胞和基质胶

1.细胞培养：

培养细胞至对数生长期，通常在6小时到24小时之间。细胞应处于健康状态，且不发生过度汇合。

2.基质胶准备（Matrigel）：

预先将Matrigel融化至4°C（避免加热过高温度，导致失活）。

在Transwell小室的上侧（膜表面）涂布一定量的Matrigel，通常为50-100 μL（根据实验要求调整）。此时Matrigel应覆盖膜孔的表面，但不能形成厚膜。放入培养箱中，使Matrigel在37°C下固化约30-60分钟。

（二）细胞接种和侵袭培养

1.细胞悬液准备：

用含有完全培养基的溶液将细胞调至合适的浓度（通常为1×10⁶ cells/mL），确保细胞均匀分布。

2.接种细胞：

取一定量细胞悬液加入Transwell小室上层（Matrigel涂布的部分），确保每孔的细胞密度一致。培养24小时，使细胞在基质胶中适应并开始侵袭。

3.在下室中加入一定量培养基，不同规格的小室和培养板所加的体积不同，具体参考产品说明书。

4.细胞侵袭：

将培养板放入37°C、5% CO2的培养箱中培养24-48小时。细胞会通过基质胶层迁移并侵袭到下室。

（四）去除非侵袭细胞

1.去除上室非侵袭细胞：

用PBS或培养基轻轻冲洗上室，去除未侵袭的细胞。

2.固定侵袭细胞：

将培养板移至室温，使用4%多聚甲醛固定下室膜表面的细胞，固定10-15分钟。

3.染色：

用结晶紫或吉姆萨染色液染色固定后的细胞，染色5-10分钟。然后用PBS冲洗掉多余的染料，确保膜表面清洁。

（五）定量和数据分析

1.细胞计数：

使用显微镜观察并计数每个孔内下室膜表面上侵袭的细胞。可以使用细胞计数器或者图像分析软件来自动计数。根据计数结果，可以计算每个实验组的侵袭细胞数。

2.定量分析：

计算侵袭细胞的平均数量，并与对照组进行比较。侵袭能力较强的细胞组通常表现为更高的细胞计数。

3.数据分析：

根据实验数据，评估不同条件下细胞的侵袭能力。

总之，细胞侵袭实验是一种评估细胞侵袭能力的有力工具，广泛应用于肿瘤、转移、免疫学等研究。

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