一、基本信息

产品编号：RR086A/RR086B

产品规格：100 Rxns / 100 Rxns×5

产品描述：本产品是一种基于TB Green嵌合荧光染料的一步法实时荧光逆转录聚合酶链式反应（One Step Real Time RT-PCR）专用预混试剂。该试剂将高效的逆转录酶与热启动DNA聚合酶整合于同一反应体系中，可在单管内依次完成RNA的逆转录与cDNA的实时荧光PCR扩增与检测。其优化的缓冲体系旨在提供高扩增效率与特异性，尤其适用于RNA病毒等低丰度RNA靶标的高灵敏度定量与定性分析。

二、产品应用

本产品适用于多种基于RNA模板的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）应用。

△基因表达分析：对特定基因的mRNA转录水平进行相对或绝对定量。

△病毒RNA检测：快速、灵敏地检测RNA病毒基因组，适用于病原体诊断与研究。

△微量RNA分析：针对样本量有限或目标RNA拷贝数极低的样品进行高灵敏度检测。

△高通量筛选：适用于需要快速进行大量样本RNA靶标分析的实验场景。

三、产品优势

✅一体化设计：将逆转录与实时荧光PCR步骤整合于单一反应体系，简化操作流程，减少移液步骤与交叉污染风险。

✅高灵敏度：采用优化的酶与缓冲系统，结合实时荧光检测技术，能够实现对极低拷贝数RNA模板的精准检测。

✅高特异性：经过改良的反应缓冲液与热启动酶技术相结合，有效抑制非特异性扩增，确保扩增产物的准确性。

✅操作便捷：所有关键酶组分已预混为单一酶混合液（Enzyme Mix），便于快速配制反应体系，提升实验效率。

✅广泛兼容性：适用于包括Applied Biosystems、Roche LightCycler及Takara Thermal Cycler Dice系列在内的多种主流实时荧光PCR仪。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 反应体系配制：于冰上按推荐比例混合2X One Step Buffer、Enzyme Mix、上下游引物、RNA模板及无RNase水，配制总体积为20μL的反应体系。

2. 仪器程序设置：根据所用实时荧光PCR仪型号，设置包含逆转录（通常50°C，5-15分钟）、预变性（95°C，30秒）以及40-45个循环的扩增（95°C变性5秒，60°C退火/延伸30秒，并采集荧光信号）步骤的程序。

3. 上机运行：将配制好的反应管置于仪器中，启动运行预设的qRT-PCR程序。

4. 数据分析：程序运行结束后，利用仪器配套软件分析扩增曲线与Ct值，进行定量或定性分析。

五、注意事项

1. 保存条件：所有组分需保存于-20°C，避免反复冻融。使用后请立即放回。

2. 酶混合液使用：PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2因含甘油而粘度较高，使用前需轻柔混匀并短暂离心，吸取时应缓慢操作以确保体积准确。

3. 防污染措施：实验操作应在洁净区域进行，使用无RNase的耗材与试剂，并建议设立阴性对照以监控污染。

4. 预混液配制：进行多重复反应时，建议先配制不含模板的Master Mix，充分混匀后再分装至各反应管，最后加入模板，以提高反应均一性。

5. RNA样品质量：RNA模板的纯度与完整性是实验成功的关键，应使用可靠方法制备，避免基因组DNA污染与RNA降解。

六、相关产品推荐

1. One Step TB Green PrimeScript PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (货号：RR096A)：具备更高逆转录效率与稳定性的升级版一步法qRT-PCR试剂。

2. One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (货号：RR064A)：基于SYBR Green I荧光染料的一步法实时荧光RT-PCR试剂盒。

3. TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (货号：RR820Q)：适用于以cDNA或DNA为模板的、高特异性两步法实时荧光PCR反应的预混试剂。