一、基本信息

产品名称：Stbl3化学感受态细胞

产品货号：DL1046S/DL1046M

规格：10×100μl/ 50×100μl

保存温度：-80℃

二、产品介绍

Stbl3化学感受态细胞是基于HB101大肠杆菌菌株构建的工程菌株，其基因组携带重组酶recA13突变，能有效抑制含有长末端重复序列（LTR）等不稳定DNA片段的重组，是进行慢病毒等逆转录病毒载体克隆与扩增的推荐宿主。该产品转化效率高，适用于对遗传稳定性要求较高的分子克隆实验。

三、产品应用

本产品主要用于克隆含有不稳定重复序列或二级结构的DNA片段，特别是逆转录病毒载体系统。

△不稳定片段克隆：适用于克隆含有长末端重复序列（LTR）等易发生重组的DNA片段。

△病毒载体构建：专门用于慢病毒、逆转录病毒等病毒载体的质粒构建与扩增。

△质粒制备：用于制备高拷贝数的重组质粒。

四、产品优势

✅遗传稳定：基因组中recA13基因突变，可显著降低长片段同源重组的发生概率，维持插入片段稳定性。

✅高效转化：经特殊工艺制备，转化效率可达>10^8 cfu/μg pUC19 DNA。

✅专用宿主：作为慢病毒载体系统的推荐菌株，其遗传背景适用于病毒质粒操作。

✅链霉素抗性：携带链霉素抗性基因（rpsL20），为克隆筛选提供一种选择标记。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 冰上融化：将感受态细胞从-80℃取出，立即置于冰浴中静置约5分钟至完全融化。

2. 加入DNA：向融化的细胞中加入目的DNA，轻柔混匀后继续冰浴25分钟。

3. 热激转化：将离心管置于42℃水浴中热激45秒，随后快速转移至冰浴静置2分钟。

4. 复苏培养：加入0.9 mL室温的SOC或LB培养基，在37℃摇床225 rpm复苏60分钟，或30℃复苏90分钟。

5. 涂布平板：5000 rpm离心1分钟收集菌体，用约100 μL上清液重悬菌体，涂布于含相应抗生素的平板。

6. 培养筛选：将涂布后的平板倒置，于37℃或30℃培养箱中过夜培养。

六、注意事项

1. 培养温度：对于不稳定克隆或病毒载体，涂布后的平板建议在30℃培养，以进一步降低重组风险。

2. 质粒提取：为获得高纯度质粒，建议使用新鲜转化的单菌落接种培养，并使用质粒提取试剂盒中的去蛋白步骤以去除残留核酸酶。

3. 质粒保存：对于不稳定的重组质粒或病毒质粒，建议以质粒DNA形式于-20℃保存，而非长期以菌种形式保存。

4. 培养基选择：可使用SOC或LB培养基进行复苏，其中SOC培养基通常可获得更高的转化效率。

5. 操作时效：感受态细胞融化后，建议在冰浴中8分钟内加入目标DNA，以确保最佳转化效率。

七、相关产品推荐

1. SOC Broth (液体预混培养基粉剂)（货号：CM1014L）

2. LB with Agar (固体预混培养基)（货号：CM1010S）

3. 农杆菌质粒提取试剂盒（货号：AVK0100）

4. 硫酸卡那霉素（货号：YC9020S）