一、基本信息

产品编号：DP117

核心特点：高效、高纯度、无内毒素、快速

产品描述：EndoFree Maxi Plasmid Kit无内毒素质粒大提试剂盒是一款基于硅胶膜吸附柱技术的无内毒素质粒DNA大规模纯化试剂盒。该试剂盒通过优化的裂解和结合步骤，能高效专一地结合质粒DNA，并有效去除内毒素、蛋白质、RNA及其他杂质。整个纯化流程可在约一小时内完成，最终获得的超纯质粒DNA适用于多种下游应用。

二、产品应用

EndoFree Maxi Plasmid Kit 纯化的高纯度质粒DNA适用于多种分子生物学及细胞生物学实验。

△分子克隆实验：适用于限制性酶切、连接反应及PCR扩增。

△DNA测序：获得的DNA纯度满足Sanger测序等高通量测序要求。

△细胞转染：纯化的无内毒素质粒可直接用于多种真核细胞的瞬时或稳定转染。

△体内实验：高纯度DNA可用于动物体内注射等对DNA纯度要求苛刻的实验。

△细菌转化：纯化的质粒可用于高效转化感受态细胞。

三、产品优势

✅高效纯化：采用专有的硅胶膜吸附技术，对质粒DNA具有高结合容量和高回收率。

✅内毒素去除：独特的纯化流程能有效去除内毒素，满足细胞转染和体内实验的严苛要求。

✅操作快捷：优化的实验方案使从细菌裂解到DNA洗脱的整个过程可在约一小时内完成。

✅广泛兼容：纯化的质粒DNA适用于酶切、连接、PCR、测序、转染及转化等多种下游应用。

✅高纯度产出：最终产物的A260/A280比值通常介于1.8-2.0之间，表明蛋白质和RNA污染极低。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 吸附柱平衡：向吸附柱CP6中加入平衡液BL，离心以活化硅胶膜。

2. 菌体收集：取适量过夜培养的菌液离心，彻底弃去上清。

3. 菌体重悬：向菌体沉淀中加入含RNase A的溶液P1，充分重悬。

4. 细胞裂解：加入溶液P2，温和混匀以裂解细胞，室温静置。

5. 沉淀中和：加入溶液P4中和裂解液，形成絮状沉淀，离心后取上清过滤。

6. 质粒结合：向滤液中加入异丙醇，混匀后转移至平衡过的吸附柱中离心。

7. 杂质洗涤：用漂洗液PW洗涤吸附柱两次，以去除残留杂质。

8. 柱床干燥：加入无水乙醇洗涤后，离心以彻底去除残留乙醇。

9. 质粒洗脱：向膜中央加入洗脱缓冲液TB，静置后离心收集高纯度质粒DNA。

五、注意事项

1. 试剂配制：溶液P1需在使用前加入RNase A，混匀后于2-8°C保存。

2. 试剂状态：使用前应检查BL、P2、P4等溶液，如有沉淀需37°C水浴加热溶解。

3. 安全操作：溶液P2和P4具有腐蚀性，应避免接触，使用后立即盖紧瓶盖。

4. 过滤操作：使用过滤器CS1时，应缓慢抽动推柄，防止滤膜松动或破裂。

5. 样品量调整：对于低拷贝或大片段（>10 kb）质粒，需按比例增加菌体用量及裂解试剂体积。

6. 柱预处理：实验开始前用平衡液BL处理吸附柱是必要的步骤，可提高DNA结合效率。

7. 柱时效性：经平衡液处理后的吸附柱应尽快使用，长时间放置可能影响其结合性能。

六、相关产品推荐

1. 质粒小提试剂盒（货号：DP103）：用于少量细菌培养物的质粒DNA快速小量提取。

2. 无内毒素质粒中提试剂盒（货号：DP108）：适用于中等规模培养的无内毒素质粒DNA纯化。

3. 高纯度质粒大提试剂盒（货号：DP116）：用于大规模培养的质粒DNA制备，适用于常规分子生物学实验。