一、基本信息

产品编号：DP108

核心特点：高效、无内毒素、高纯度

产品描述：本试剂盒是一种基于硅胶膜吸附技术的中等规模质粒DNA纯化系统，通过整合专用的内毒素清除溶液EBT和澄清过滤器CS1，能有效去除细菌裂解物中的内毒素、蛋白质及RNA等杂质。整个纯化流程可在约1小时内完成，适用于从20-50 mL细菌培养物中提取高纯度质粒DNA。对于高拷贝质粒，典型得率范围为80-250 μg；对于低拷贝质粒，典型得率范围为20-50 μg。

二、产品应用

无内毒素质粒中量提取试剂盒纯化的质粒DNA适用于多种下游分子生物学及细胞生物学应用。

△分子克隆：适用于限制性酶切、连接反应及PCR扩增等常规操作。

△测序分析：所得DNA纯度满足Sanger测序或下一代测序的模板要求。

△细胞转染：极低的内毒素水平使其特别适合对转染效率敏感的哺乳动物细胞转染实验。

△体内实验：高纯度DNA可直接用于对核酸纯度要求严苛的动物体内实验。

三、产品优势

✅高纯度：通过EBT溶液特异性结合与过滤步骤，有效去除内毒素，A260/A280比值通常在1.7-1.9之间。

✅高效率：优化的硅胶膜结合与洗脱方案，可在约60分钟内完成从菌体收集到DNA洗脱的全流程。

✅高兼容性：纯化的DNA兼容多种高灵敏度应用，包括转染和体内注射。

✅操作简便：采用离心柱形式，步骤清晰，无需苯酚/氯仿抽提或醇类沉淀。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 柱平衡：向CP7吸附柱中加入2 mL平衡液BL，5000 ×g离心2分钟以活化硅胶膜，弃废液。

2. 菌体收集：取20-50 mL菌液，5000 ×g离心3分钟，彻底弃尽上清。

3. 重悬：向菌体沉淀中加入2.5 mL溶液P1，涡旋或吹打至沉淀完全重悬。

4. 裂解：加入2.5 mL溶液P2，立即温和颠倒混匀6-8次，室温静置5分钟。

5. 中和：加入1.25 mL溶液E3，立即温和颠倒混匀6-8次，室温静置2-3分钟后，5000 ×g离心10分钟。

6. 澄清过滤：将上清液全部转移至CS1过滤器中，缓慢推动推柄，收集滤液于洁净离心管。

7. 内毒素清除：向滤液中加入等体积溶液EBT，立即颠倒混匀7-10次。

8. 结合：每次取4 mL混合液上样至CP7柱，5000 ×g离心3分钟，重复直至全部溶液过柱。

9. 漂洗I：加入2 mL漂洗液GDE，5000 ×g离心3分钟，弃废液。

10. 漂洗II：加入3 mL漂洗液MRDE，5000 ×g离心3分钟，弃废液。

11. 漂洗III：加入3.5 mL漂洗液PWF，5000 ×g离心3分钟，弃废液。

12. 重复漂洗III：再次加入3.5 mL漂洗液PWF，5000 ×g离心3分钟，弃废液。

13. 干燥：空柱5000 ×g离心10分钟，以彻底去除残留乙醇。

14. 洗脱：将CP7柱置于新收集管中，向膜中央悬空加入0.5-1 mL洗脱缓冲液TB，室温静置2-3分钟后，5000 ×g离心5分钟收集DNA。

五、注意事项

1. 试剂配制：首次使用前，需按标签说明向漂洗液PWF和MRDE中加入指定量无水乙醇；溶液P1需加入RNase A后于2-8℃保存。

2. 溶液状态：使用前检查BL、P2、E3、EBT是否有沉淀，如有可在37℃水浴加热10分钟至澄清。

3. 安全操作：避免皮肤直接接触溶液P2、E3和EBT，使用后立即盖紧瓶盖。

4. 滤器使用：操作CS1过滤器时，应缓慢平稳地推动推柄，以防滤膜松动。

5. 样品量调整：提取低拷贝或大于10 kb的大质粒时，需按比例增加菌体用量及P1、P2、E3、EBT试剂体积。

6. 柱平衡时效：经BL平衡处理后的吸附柱应尽快使用，避免长时间放置导致结合效率下降。

7. 耗材区分：试剂盒提供的15 mL收集管仅用于离心步骤，不可用于初始菌液收集。

六、相关产品推荐

1. 质粒小量提取试剂盒（货号：DP103）：适用于1-5 mL菌液的小规模质粒DNA快速纯化。

2. 无内毒素质粒大量提取试剂盒（货号：DP117）：适用于100-200 mL菌液的大规模高纯度质粒制备，适用于体内实验。

3. 质粒小提中量试剂盒（货号：DP106）：适用于常规分子克隆应用的中等规模质粒提取，不含内毒素清除步骤。