一、基本信息

产品名称：2×Hieff Canace® Plus PCR预混液 (含染料)

产品货号：10154ES01/ 10154ES03 / 10154ES08

规格：100 μL / 1 mL / 1 mL × 5支

保存温度：-25~-15℃保存

二、产品介绍

本产品为即用型2×预混液，核心组分包括高保真DNA聚合酶Hieff Canace® Plus、dNTPs及优化缓冲液。其通过Hot Start单克隆抗体技术确保反应特异性，并兼具高保真度（保真性约为Taq DNA聚合酶的83倍）与长片段扩增能力（可达13 kb）。扩增产物为平末端，适用于复杂模板的扩增，且预混液内含电泳染料，产物可直接进行电泳分析。

三、产品应用

该产品适用于多种高保真PCR扩增应用，具体包括：

△ 高保真扩增：用于对保真度要求高的克隆、测序及定点突变等实验。

△ 长片段扩增：可扩增长达13 kb的DNA片段。

△ 复杂模板扩增：适用于GC含量高、二级结构复杂或拷贝数低的困难模板。

△ 快速PCR：推荐采用两步法程序，简化步骤，缩短实验时间。

四、产品优势

✅ 高保真性：聚合酶具有3’→5’核酸外切酶校正活性，保真度远高于常规Taq和Pfu DNA聚合酶。

✅ Hot Start技术：通过抗体在常温下抑制酶活，有效减少引物二聚体和非特异性扩增。

✅ 操作简便：预混体系包含除引物和模板外的所有组分，只需两步混合即可上机。

✅ 长程扩增：添加延伸因子，显著提升聚合酶持续合成能力，支持超长片段扩增。

✅ 体系稳定：含有特殊保护剂，可耐受多次冻融，活性保持稳定。

✅ 即用型检测：预混液含电泳染料，PCR产物无需添加Loading Buffer即可直接上样电泳。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：于冰上按推荐比例混合预混液、模板DNA及上下游引物，涡旋混匀后短暂离心。

2. 程序设置：将反应管置于PCR仪，优先采用两步法程序（如98℃预变性后，98℃变性与60℃退火/延伸循环）。

3. 预变性：设置98℃ 3-5分钟，对于高GC含量模板可延长至10分钟。

4. 循环扩增：根据片段长度设置循环数，变性98℃ 10秒，退火/延伸60℃ 20-30秒/kb。

5. 终延伸：程序结束后，建议72℃延伸5分钟，以确保产物完整性。

6. 产物分析：反应完成后，可取部分产物直接进行琼脂糖凝胶电泳分析。

六、注意事项

1. 储存条件：建议于-20℃保存，避免反复冻融，虽产品稳定性佳，但仍推荐分装使用。

2. 模板质量：使用高纯度、未降解的模板DNA，并控制用量，cDNA体积不应超过总体积的10%。

3. 引物设计：遵循引物设计通用原则，推荐使用0.4 μM作为终浓度起始点进行优化。

4. 退火时间：退火时间不宜过长，通常10-30秒，过长时间可能导致扩增条带弥散。

5. 程序选择：对于常规扩增优先使用两步法；对于困难模板，可尝试三步法或梯度退火程序。

6. 实验安全：本品仅供科研使用，操作时请穿戴实验服与手套，遵守实验室生物安全规范。

七、相关产品推荐

1. 2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix（货号：10163ES）

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