一、基本信息

产品名称：Opal Polaris 480 试剂盒

产品货号：FP1500001KT

规格：包含 Opal Polaris 480 试剂 1 管，二甲基亚砜 1×100 μL

保存温度：干粉试剂避光保存于-20°C；溶解于DMSO后，避光保存于4°C

二、产品介绍

Opal Polaris 480 试剂盒是一种用于多重免疫组化（IHC）研究的荧光标记试剂系统。该试剂包含一种特定的荧光染料，可与辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗结合，通过酪胺信号放大技术实现高灵敏度、多通道的组织原位蛋白检测，适用于手动或自动化染色平台。

三、产品应用

Opal Polaris 480 试剂盒主要用于多重免疫荧光染色研究。

△空间表型分析：用于在组织原位同时检测多个生物标志物，解析细胞的空间分布与相互作用。

△肿瘤微环境研究：适用于分析肿瘤组织中免疫细胞亚群、基质细胞及肿瘤细胞的复杂表型。

△神经科学研究：用于脑组织等复杂结构中多种蛋白的共定位与表达水平分析。

△自身免疫性疾病研究：应用于研究炎症组织中多种免疫细胞标志物的共表达情况。

四、产品优势

✅高灵敏度：基于酪胺信号放大技术，可有效检测低丰度靶标，提供清晰的荧光信号。

✅多重兼容性：染料光谱经过优化，适用于多色标记，便于与Opal系列其他荧光染料组合进行多重检测。

✅平台灵活性：试剂盒兼容手动与自动化染色平台，提供相应的稀释液，实验流程适应性广。

✅信号稳定性：荧光信号在适当的封片剂中可保持较长时间的稳定性，利于后续成像与分析。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 样本准备：组织切片经烘烤、脱蜡、水化后，用10%中性缓冲福尔马林复固定，并进行抗原修复。

2. 微波修复：将切片置于抗原修复缓冲液中，进行微波加热处理以暴露抗原表位，随后冷却并洗涤。

3. 封闭：使用疏水笔圈定组织区域，加入封闭液室温孵育，以降低非特异性背景。

4. 一抗孵育：去除封闭液，加入优化浓度的一抗工作液，按建议条件孵育，随后彻底洗涤。

5. 二抗孵育：加入HRP标记的聚合物二抗，室温孵育，使HRP与一抗结合。

6. 荧光信号生成：加入稀释好的Opal Polaris 480荧光工作液，室温孵育，通过HRP催化产生沉积的荧光信号，随后洗涤。

7. 抗体剥离：进行第二轮微波处理，以去除上一轮的一抗-二抗-HRP复合物，为下一靶标检测做准备。

8. 复染封片：完成所有靶标检测后，使用DAPI复染细胞核，水洗后使用抗淬灭封片剂封片。

六、注意事项

1. 安全防护：DMSO为易燃有害试剂，操作时需佩戴手套和护目镜，并在操作后彻底洗手。

2. 试剂配制：干粉试剂需用提供的DMSO充分溶解，静置至少20分钟以确保完全溶解，避免产生气泡。

3. 工作液制备：使用前需将浓缩荧光试剂用对应的1X Plus Amplification Diluent按推荐比例稀释，现配现用，用后丢弃。

4. 优化实验：进行多重检测前，建议对每个靶标进行单标实验优化，确保信号强度适宜且无交叉干扰。

5. 防干燥处理：实验过程中，尤其是微波修复后冷却阶段，需确保组织切片始终湿润，避免干燥。

6. 光谱库构建：用于构建光谱库的单标染色切片不应进行DAPI复染，以保证光谱纯度的准确性。

七、相关产品推荐

1. 1X Plus Manual Amplification Diluent(货号：FP1135)

2. Opal™ 520 Reagent Pack (货号：FP1487001KT)

3. Opal™ 540 Reagent Pack (货号：FP1494001KT)

4. Opal™ 690 Reagent Pack (货号：FP1497001KT)