一、基本信息

产品名称：热启动Cesium Klentaq AC DNA聚合酶

产品货号：HS240

规格：100 µl（可进行约1000次50 µl反应体系）

保存温度：-20°C

二、产品介绍

热启动Cesium Klentaq AC是一种基于适配体技术的热启动DNA聚合酶，可在室温下进行反应体系配制。该酶是Klentaq1（一种具有更高保真度和热稳定性的5‘核酸外切酶缺陷型Taq聚合酶）的双重冷敏感突变体。其低温下活性被抑制的特性，结合适配体在亚循环温度下与酶结合并使其失活的作用，共同实现了优异的热启动性能，可有效防止非特异性扩增。产品配套的10×反应缓冲液包含500 mM Tris-Cl (pH 9.2)、160 mM 硫酸铵、0.25% Brij 58和35 mM 氯化镁。

三、产品应用

热启动Cesium Klentaq AC适用于多种需要高特异性和高保真度的PCR扩增实验。

△常规PCR：用于标准模板的DNA片段扩增。

△高保真PCR：其突变体特性提供了优于野生型Taq酶的保真度，适用于对序列准确性要求高的实验。

△热启动PCR：适配体介导的热启动机制，有效抑制低温下的引物非特异性结合及延伸，提升扩增特异性。

△复杂模板扩增：推荐配合专用的PCR增强剂使用，以应对含有抑制物的样本（如全血、土壤粗提物）或高GC含量等复杂模板。

四、产品优势

✅热稳定性：在95°C孵育1小时后，仍能保持至少85%的酶活性，确保长片段或多循环扩增的稳定性。

✅热启动性能：结合冷敏感突变与适配体抑制双重机制，在低温下完全失活，仅在热循环第一步变性温度下激活，极大降低非特异性背景。

✅操作便捷：基于适配体的热启动技术允许在室温下配制反应体系，无需额外的激活步骤或专用设备。

✅缓冲体系优化：配套的10×缓冲液经过优化，含有适宜的pH、盐离子及去垢剂，为扩增提供稳定环境。

五、使用说明（实验流程概要）

以下为25 µl反应体系的典型配制与循环条件概要：

1. 体系配制：于冰上或室温下，依次加入模板DNA、引物、dNTPs、10×反应缓冲液、推荐用量的PCR增强剂、适量热启动Cesium Klentaq AC酶，最后用无核酸酶水补足至终体积。

2. 初始变性：将反应管置于热循环仪中，94°C孵育2-8分钟，以充分变性模板并激活聚合酶。

3. 循环扩增：进行25-40个循环，每个循环包括94°C变性40-60秒，根据引物Tm值在50-68°C退火40-60秒，68°C延伸（按每kb目标片段2分钟计算）。

4. 终末延伸：循环结束后，建议在68°C进行5-10分钟的最终延伸，以确保产物完整性。

5. 保存：反应完成后，将产物置于4°C保存或进行后续分析。

六、注意事项

1. 保存条件：产品需长期保存于-20°C，避免反复冻融。运输可在常温下进行。

2. 酶量优化：对于不同靶标，强烈建议进行酶量滴定实验以确定最佳用量。25 µl反应体系中，0.05 µl为推荐的起始尝试量。

3. 长片段扩增：扩增大于1 kb的片段时，可能需要增加酶量或考虑使用该酶的长片段高保真（LA）版本。

4. 增强剂使用：为获得最佳性能，特别是对于复杂模板，推荐使用配套的PCR增强剂混合物（如PEC-1, PEC-1GC等）或1.3 M甜菜碱。

5. 模板量：模板DNA的推荐添加量为0.1-100 ng，具体取决于基因组大小及靶基因拷贝数。

七、相关产品推荐

1. Cesium Klentaq AC（货号：240）

2. Hot Start Cesium Klentaq AC LA（货号：HS250）

3. 5x Hot Start Cesium Klentaq AC PCR Kit（货号：HS260）