一、基本信息
产品名称:Lipo6000™转染试剂
产品货号:C0526
规格:0.5ml / 1.5ml / 5×1.5ml
产品组分:阳离子脂质体转染试剂
递送分子类型:质粒DNA、siRNA、其他RNA、寡核苷酸、核酸蛋白复合物、带负电荷的蛋白
细胞类型:哺乳动物真核细胞,包括贴壁细胞和悬浮细胞
二、产品概述
Lipo6000™转染试剂是一种基于阳离子脂质体技术的高效核酸转染试剂。其转染效率与国际主流产品相当,适用于多种核酸分子向真核细胞的递送,并支持活体动物实验中的基因递送应用。该试剂具有操作简便、细胞毒性低、重复性好的特点,且其转染方案对含血清培养基具有良好的兼容性。
三、产品应用
△基因过表达:适用于将表达质粒DNA转染至哺乳动物细胞,用于目的基因的过表达研究。
△基因沉默:适用于将siRNA转染至哺乳动物细胞,用于实现靶向基因的RNA干扰(RNAi)与敲低。
△多组分共转染:支持多个质粒或质粒与siRNA的组合转染,用于复杂的基因功能研究。
△活体转染:可用于活体动物的直接核酸递送,适用于基因治疗等领域的临床前研究。
△蛋白递送:适用于带负电荷的蛋白质或核酸-蛋白复合物的细胞转导。
四、产品优势与特点
✅高转染效率:在多种常见哺乳动物细胞系中展现出高水平的核酸递送效率,转染效果稳定可靠。
✅广泛的兼容性:适用于贴壁细胞与悬浮细胞的转染,且转染过程基本不受培养基中血清的影响。
✅低细胞毒性:配方经过优化,在有效转染的同时对细胞生长状态的影响较小。
✅操作简便:转染流程标准化,与广泛使用的Lipofectamine® 2000试剂方案基本一致,易于上手。
✅灵活性高:支持单一或多种核酸分子的共转染,满足不同的实验设计需求。
五、使用说明(概述)
本部分概述以六孔板为格式的DNA瞬时转染标准方案。
1. 细胞铺板:于转染前24小时,将细胞接种于六孔板中,使其在转染时密度达到70%-90%汇合度。
2. 更换培养基:转染前,将细胞孔内的培养基更换为2ml新鲜的、含血清但不含抗生素的完全培养基。
3. 复合物制备:取两个无菌离心管,各加入125µl无血清、无抗生素的稀释液(如Opti-MEM®)。一管加入2.5µg质粒DNA,另一管加入5µl Lipo6000™转染试剂,分别轻柔混匀。室温静置5分钟后,将DNA稀释液全部加入转染试剂稀释液中,轻柔混合后再次室温静置5分钟,形成转染复合物。
4. 复合物添加:将250µl转染复合物均匀滴加至含细胞的孔中,轻轻晃动培养板使其分布均匀。
5. 培养与换液:将细胞放回培养箱孵育4-6小时,随后更换为新鲜的完全培养基以优化细胞状态与转染效率。
6. 检测分析:继续培养24-48小时后,通过适当的方法检测目的基因的表达情况。
六、注意事项
1. 核酸质量:使用高纯度、无菌、无内毒素污染的DNA或RNA是获得高转染效率的关键前提。
2. 细胞状态:转染前需确保细胞处于对数生长期,形态良好且无支原体污染。
3. 试剂保存:本品需避光保存于4°C,长期不用可置于-20°C。使用前请轻柔摇晃混匀,避免涡旋振荡或离心。
4. 操作环境:配制转染复合物时需使用无血清、无抗生素的培养基作为稀释液,并在室温下操作。
5. 生物安全:本产品仅限于科学研究用途,操作时请穿戴适当的个人防护装备。
6. 条件优化:对于新型细胞系或特殊实验,建议对DNA/试剂比例、细胞密度及复合物孵育时间进行优化。
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