一、基本信息

产品名称：磷酸钙法细胞转染试剂盒

货号：C0508

规格：>200次

产品组分：20ml BBS溶液、20ml 氯化钙溶液及说明书一份。

递送分子类型：质粒DNA，适用于多种贴壁细胞（如HEK293、Hela、CHO）及部分悬浮细胞的转染。

二、产品概述

本试剂盒基于经典的磷酸钙共沉淀法进行优化，旨在提高外源DNA导入哺乳动物细胞的转染效率，同时降低细胞毒性。该体系适用于基因的瞬时表达与稳定细胞系的筛选，操作简便，适用于多种常见细胞系。

三、产品应用

△基因功能研究：通过将外源质粒DNA导入细胞，实现目的基因的过表达或干扰，以研究其生物学功能。

△蛋白表达与纯化：在哺乳动物细胞中高效表达重组蛋白，用于后续的纯化、结构或功能研究。

△稳定细胞系构建：通过转染与药物筛选，可获得稳定整合外源基因的细胞株，用于长期实验。

△病毒包装：作为辅助手段，将病毒包装所需质粒共转染至包装细胞中，用于制备重组病毒。

四、产品优势与特点

✅高效转染：经工艺改良，对HEK293等适用细胞系可实现高达90%以上的转染效率。

✅广泛兼容：适用于多种贴壁细胞及部分悬浮细胞，应用范围广。

✅低细胞毒性：优化配方有效降低了传统方法对细胞的损伤，有利于转染后细胞的健康生长。

✅即用无菌：试剂组分均经无菌处理，可直接用于细胞实验，简化操作流程。

✅经济高效：单试剂盒可完成不少于200次转染实验，性价比高。

五、使用说明（概述）

本试剂盒用于质粒DNA的瞬时转染，基本操作流程如下：

1. 细胞准备：将贴壁细胞接种于培养器皿中，待融合度达70%-80%时进行转染；转染前更换为新鲜无抗生素培养液。

2. DNA复合物制备：将适量质粒DNA与氯化钙溶液混合，再将此混合液逐滴加入等体积BBS溶液中，轻柔混匀。

3. 孵育形成沉淀：将上述混合液于室温静置孵育10-20分钟，直至形成细微的DNA-磷酸钙共沉淀颗粒。

4. 复合物添加：将形成的共沉淀混合物均匀滴加至细胞培养液中。

5. 细胞共孵育：将细胞置于37°C、5% CO₂培养箱中培养4-16小时。

6. 换液去除沉淀：吸弃含有沉淀的旧培养液，更换为新鲜完全培养液，继续培养。

7. 表达检测：转染约24小时后，可检测外源基因的表达情况。

六、注意事项

1. 操作顺序：必须将DNA-氯化钙混合液加入BBS溶液中，反向操作可能影响沉淀形成与转染效率。

2. DNA质量：高纯度、超螺旋结构占比高的质粒DNA是获得高转染效率的关键，建议A260/A280比值>1.8。

3. 培养条件：转染过程中细胞培养箱的CO₂浓度不宜超过5%，最佳范围约为3%，以维持培养基pH稳定。

4. BBS溶液保存：BBS溶液pH值至关重要，需密封保存，避免长时间暴露于空气导致CO₂溶入而酸化。

5. 条件优化：针对不同的细胞类型和质粒，需对DNA用量、沉淀形成时间及细胞暴露时间等参数进行优化。

6. 用途限定：本品仅限用于科学研究，不可用于临床诊断、治疗或作为食品、药品使用。

7. 安全防护：操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套，遵循实验室安全规范。

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