一、基本信息

产品名称：杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒

产品编号：D0031

核心特点：操作简便、安全无毒、无需酚氯仿抽提、无需柱纯化

产品描述：本试剂盒专为从大肠杆菌DH10Bac中快速、高效地小量制备高纯度杆状病毒穿梭载体bacmid而设计。其采用优化的裂解与沉淀方案，有效克服了大片段bacmid DNA的提取难题，所获得的产物质量高，适用于后续的昆虫细胞转染实验。

二、产品应用

本产品主要用于杆状病毒表达系统中重组bacmid DNA的制备。

△昆虫细胞转染：为使用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达重组蛋白提供高质量的bacmid DNA模板。

△重组杆状病毒制备：作为初始材料，用于在昆虫细胞中产生重组杆状病毒。

△分子克隆验证：提取的bacmid可用于PCR、酶切等分子生物学鉴定，以确认外源基因的正确插入。

三、产品优势

✅安全性：不使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，实验操作更安全环保。

✅高效性：优化的裂解与中和步骤，能有效处理大分子量bacmid，获得高得率。

✅便捷性：实验流程无需柱纯化步骤，简化操作，节省时间。

✅兼容性：经测试，提取的bacmid可直接与多种昆虫细胞转染试剂兼容，用于高效转染。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 细菌培养：挑取DH10Bac阳性克隆白斑，于SOC培养基中过夜培养。

2. 菌体收集：取适量过夜培养菌液，离心弃上清，收集细菌沉淀。

3. 重悬菌体：加入溶液I（含RNase A）充分重悬细菌沉淀。

4. 细胞裂解：加入溶液II，轻柔颠倒混匀至溶液变澄清，完成裂解。

5. 沉淀杂质：加入溶液III中和并沉淀杂质，离心后收集上清。

6. DNA沉淀：向上清中加入预冷异丙醇，冰浴沉淀DNA，离心收集沉淀。

7. 洗涤纯化：使用预冷的70%乙醇洗涤DNA沉淀两次，以去除盐分。

8. 溶解保存：室温干燥沉淀，使用TE缓冲液溶解DNA，于-20℃保存备用。

五、注意事项

1. 试剂预处理：首次使用前，需将RNase A全部加入溶液I中，混匀后于4℃保存。

2. 试剂状态：使用前检查溶液II和III，如有沉淀，需37℃水浴溶解并混匀后使用。

3. 裂解操作：加入溶液II后应轻柔颠倒混匀，避免剧烈震荡产生气泡，且总裂解时间不宜超过5分钟。

4. 安全防护：溶液II具强碱性，溶液II和III均有刺激性，操作时需穿戴实验服和手套，并在通风橱内进行。

5. 产品用途：本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断、治疗或食品药品领域。

六、相关产品推荐

1. DH10Bac甘油菌（货号：D0346）：用于重组bacmid制备的专用大肠杆菌菌株。

2. pFastBac1-EGFP阳性对照质粒（货号：D2802）：用于杆状病毒系统构建与优化的阳性对照。

3. LipoInsect™转染试剂（货号：C0551）：专为昆虫细胞设计的高效转染试剂，与本品提取的bacmid兼容性良好。