一、基本信息

产品名称：phi29 DNA Polymerase

产品货号：D7053S / D7053M / D7053L / D7053XL

规格：250U / 1kU / 5kU / 20kU

保存温度：-20°C

二、产品介绍

本产品为重组表达纯化的phi29 DNA聚合酶，来源于枯草芽孢杆菌噬菌体phi29。该酶具有强大的链置换活性和持续合成能力，能够进行长片段（>70 kb）的DNA合成，适用于不依赖热循环的等温DNA扩增。其固有的3‘→5’外切酶校对活性确保了扩增过程的高保真性。

三、产品应用

phi29 DNA Polymerase适用于多种等温核酸扩增及全基因组扩增应用。

△高保真等温扩增：用于不依赖热循环仪的长片段DNA高效、高保真合成。

△滚环复制（RCA）：适用于环状DNA模板的指数级扩增。

△多重置换扩增（MDA）：用于对微量DNA样本进行全基因组扩增。

△全基因组扩增（WGA）：适用于单细胞、病原微生物及宏基因组样本的基因组扩增。

△复杂样本分析：可用于干血斑、FFPE样本中DNA的扩增，支持后续SNP分型、STR分析等。

四、产品优势

✅高持续合成能力：单次结合可连续合成超过70 kb的DNA片段，适合长片段扩增。

✅高保真性：内置3‘→5’外切酶校对活性，显著降低扩增错误率。

✅强链置换活性：无需解链步骤即可进行等温扩增，简化实验流程。

✅高灵敏度：能够对低至单拷贝的基因组模板进行有效扩增。

✅应用广泛：兼容多种模板类型，包括基因组DNA、质粒及单链DNA。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：在冰浴上按顺序加入Nuclease-free水、10X Reaction Buffer、dNTP、随机引物和DNA模板，混匀。

2. 模板变性：将反应体系于95°C孵育5分钟，随后立即冰浴冷却。

3. 酶促反应：加入phi29 DNA Polymerase，于30°C恒温孵育2至16小时。

4. 反应终止：将反应体系置于65°C孵育10分钟以使酶失活。

5. 产物检测：取适量扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。

六、注意事项

1. 储存条件：10X Reaction Buffer应避免反复冻融，长期储存后建议在反应体系中补充DTT至终浓度5 mM。

2. 引物设计：为减少酶3‘→5’外切酶活性对引物的降解，建议对引物3‘端进行硫代磷酸化修饰或使用高浓度随机引物。

3. 防污染措施：操作需使用无核酸酶耗材，并推荐设置不含模板的阴性对照以监控污染。

4. 酶活性保护：取用酶时应始终置于冰上，避免在室温下长时间放置。

5. 背景控制：若阴性对照出现扩增背景，可采用热变性预处理除酶外的反应组分以消除外源DNA污染。

七、相关产品推荐

1. dNTP Mixture (2.5mM each)（货号：D7371）

2. BeyoGel™琼脂糖预制胶(1%, NA-Red, TAE, 1X25孔)（货号：D0156A）

3. BeyoGel™琼脂糖预制胶(1.5%, NA-Red, TAE, 1X25孔)（货号：D0156B）

4. DNA上样缓冲液(6X)（货号：D0071）