一、基本信息

产品名称：细胞线粒体分离试剂盒

产品货号：C3601

规格：50-100次

保存温度：-20°C

二、产品介绍

本试剂盒用于从培养细胞中高效分离具有生理活性的线粒体。通过差速离心法，可在获得高纯度、结构完整线粒体的同时，分离得到去除线粒体的细胞浆蛋白组分。分离产物适用于线粒体功能研究、蛋白释放分析及多种下游蛋白质组学应用。

三、产品应用

本细胞线粒体分离试剂盒适用于以下研究领域：

△线粒体生理功能研究：用于检测线粒体膜电位、呼吸链活性等。

△细胞凋亡研究：适用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放过程。

△蛋白质组学分析：分离的线粒体可用于SDS-PAGE、Western Blot及双向电泳等蛋白分析。

△亚细胞蛋白提取：可同步获得高纯度的线粒体蛋白及胞浆蛋白样品。

四、产品优势

✅完整性：分离的线粒体大部分保持内膜与外膜结构完整，具备生理功能。

✅高纯度：通过优化的分离流程可获得高纯度的线粒体组分，有效减少其他细胞器污染。

✅灵活性：可根据实验需求调整离心参数，以平衡产量与纯度，或同步制备胞浆蛋白。

✅便捷性：试剂盒提供完整解决方案，包含必要的分离与裂解试剂，操作流程标准化。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 溶液准备：将试剂盒各组分室温融解，混匀后置于冰上备用；首次使用时配制100mM PMSF储存液。

2. 细胞收集：贴壁细胞经胰酶消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集。

3. 细胞洗涤：使用预冷的PBS重悬细胞沉淀，离心后彻底弃去上清。

4. 细胞预处理：加入预冷的线粒体分离试剂重悬细胞，冰浴孵育使细胞肿胀。

5. 细胞匀浆：将细胞悬液转移至预冷的玻璃匀浆器，进行机械匀浆以破碎细胞膜。

6. 效果评估：取样经台盼蓝染色后镜检，以细胞破碎率超过50%作为匀浆充分的判据。

7. 去除细胞核：将匀浆液于4°C，600g离心10分钟，收集上清。

8. 沉淀线粒体：将上清转移至新离心管，于4°C，11,000g离心10分钟，所得沉淀即为线粒体。

9. 收集胞浆蛋白：取上一步骤的上清液进一步高速离心，上清即为去除线粒体的胞浆蛋白组分。

10. 产物处理：分离的线粒体可直接用于功能分析，或裂解后用于蛋白检测。

六、注意事项

1. 试剂选用：请根据具体实验目的选择使用试剂盒中的相应组分。

2. PMSF使用：仅在制备用于蛋白分析的线粒体样品时需要添加PMSF以抑制蛋白酶活性。

3. PMSF时效：PMSF应现用现加，在加入分离试剂或裂解液前2-3分钟内与样品混合。

4. 低温操作：整个分离过程需在冰上或4°C环境下进行，所有试剂与器具需预冷。

5. 离心条件：标准离心力为600g和11,000g，为获得更高纯度可调整为1000g和3,500g。

6. 样品保存：分离后的线粒体样品应尽快使用，若需保存请置于-80°C。

7. 安全防护：台盼蓝和PMSF具毒性，操作时应穿戴实验服、手套并在通风橱内进行。

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