一、基本信息

产品编号：D4200（25次制备） / D4201（50次制备）

核心特点：超快速、中量级、高纯度、无内毒素

产品描述：ZymoPURE II 质粒中量提取试剂盒是 Zymo Research 研发的最快速、最简便的中量质粒DNA提取方案，可在不超过18分钟内，从50毫升大肠杆菌（E. coli）培养物中获得高达1.2毫克的转染级质粒DNA。该试剂盒采用改良碱裂解结合专利柱结合技术，配合真空或离心系统，实现质粒DNA的快速高效纯化，无需传统重力流柱或酒精沉淀步骤。所得DNA浓度可达6 µg/µl，内毒素水平低至≤0.025 EU/µg，适用于各种高敏感度下游应用。套装中配备彩色缓冲液，可在裂解与中和阶段直观判断操作完成度，显著减少人为失误。

二、产品应用

ZymoPURE II 质粒中量提取试剂盒专为从 E. coli 培养物中高效分离中量级质粒DNA而设计，所得DNA可直接用于：

△ 哺乳动物细胞转染（Transfection）

△ 原核细胞转化（Transformation）

△ 慢病毒、腺病毒及AAV载体生产

△ CRISPR及其他基因编辑实验

△ 测序（Sequencing）

△ 限制性内切酶消化（Restriction Endonuclease Digestion）

△ 体外转录与翻译（In Vitro Transcription/Translation）

△ PCR及其他分子生物学敏感实验

三、产品优势

✅ 极致快速：全流程 ≤18分钟完成，从细菌培养物到高纯度DNA的速度远超传统中量制备方法。

✅ 高产量与浓度：单次可获得最多1.2毫克质粒DNA，浓度可达6 µg/µl，满足中量及后续大规模实验需求。

✅ 低内毒素：产物内毒素水平 ≤0.025 EU/µg，适用于高转染效率和对内毒素敏感的细胞系。

✅ 无酒精沉淀：省略繁琐的DNA沉淀步骤，减少DNA损失并保持结构完整性。

✅ 可视化步骤：配备专利彩色缓冲液（不同颜色用于裂解和中和），方便确认操作正确完成，降低失误风险。

✅ 广泛质粒兼容性：可处理大小高达200 kb的质粒构建体（包括BAC/PAC），适用高拷贝与低拷贝质粒。

✅ 双模式操作：可选择真空过滤或微量离心方式，灵活匹配实验室现有设备。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 准备样品：收集 ≤50毫升适宜生长条件下培养的 E. coli 菌液。

2. 裂解：依次加入彩色缓冲液，根据颜色变化确认细胞裂解完全。

3. 中和：加入中和缓冲液，混匀直至白色沉淀产生并颜色变化显示反应完成。

4. 质粒结合：将中和液转移至离心柱，在微量离心机或真空系统下结合DNA至膜基质。

5. 洗涤：按说明依次用 Wash 1 和 Wash 2 缓冲液去除杂质和内毒素，Wash 2 必须为配套试剂。

6. 洗脱：使用洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl，0.1 mM EDTA，pH 8.5）回收质粒DNA，即可直接用于下游实验。

设备要求：微量离心机和/或真空抽滤系统（推荐真空压力约400 mm Hg）。

五、注意事项

1. 储存条件：彩色缓冲液和洗涤缓冲液按说明室温或4℃保存；ZymoPURE P1（含RNase A）建议冷藏保存以延长性能稳定性。

2. 真空压力：保持约400 mm Hg，压力不足可通过离心去除残液。

3. 培养基和体积：富营养培养基或超过建议体积时需延长裂解时间，并在上柱前充分离心澄清中和液，防止堵柱和产量下降。

4. 大质粒洗脱优化：对 >100 kb 的质粒，建议将洗脱缓冲液预热至50℃并延长柱上孵育至10分钟，以提高回收率。

5. Wash 2 缓冲液不可替换：ZymoPURE II 质粒中量提取试剂盒仅兼容配套 Wash 2，禁止自行配制或使用其他来源替代品。

6. 安全警告：ZymoPURE II 质粒中量提取试剂盒仅供科研用途，不得用于诊断或治疗。

六、相关产品推荐

1. DNA/RNA Shield（货号：R1100-50）：通用核酸稳定液，用于采样后保护DNA/RNA，方便储存与运输。

2. DNA/RNA Shield SafeCollect Swab Collection Kit（货号：R1160）：拭子采集与保存套装，含稳定液。

3. ZymoPURE Syringe Filter-X（货号：C1092-5）：配套真空过滤器，适用于快速裂解液过滤。

4. Zymo-Spin V-PS Column Assembly（货号：C1083-5）：配合真空或离心的离心柱组件，含15 ml与50 ml储液槽。

5. EndoZero II Spin Columns（货号：C1060-25）：专用去内毒素离心柱，用于进一步降低内毒素水平。