一、基本信息

产品编号：D4204（5次预处理）

核心特点：超高速、大容量、超高产量、无内毒素

产品描述：作为ZymoPURE质粒提取试剂盒系列的一员，Zymo质粒超大提试剂盒提供了目前最快、最简便的方法，能高效地从大肠杆菌中分离出多达25毫克转染级质粒DNA。该试剂盒采用改良的碱裂解技术，结合专利的结合系统，可在45分钟内处理高达2.5升的菌液培养物。通过真空快速结合至离心柱而非传统的低速重力流柱，并省去乙醇沉淀步骤，采用微量离心方式洗脱，该试剂盒能在显著缩短操作时间的同时大幅提高质粒DNA得率。获得的质粒DNA浓度高（可达6 µg/µl）、无内毒素且可直接用于转染实验。为方便操作，试剂盒配备彩色缓冲液，可直观显示并确认细菌细胞完全裂解与中和过程，有效避免操作误差。

二、技术参数

适用场景：适用于转染、转化、慢病毒生产、腺病毒生产、腺相关病毒（AAV）生产、CRISPR、基因组编辑、体内研究、测序、限制性内切酶消化、体外转录/翻译、PCR及其他高灵敏度应用。

结合容量：25 mg

培养物处理量：≤ 2.5 L

洗脱体积：≥ 3.0 ml

内毒素水平：≤ 0.025 EU/µg 质粒DNA

所需设备：真空装置/真空多联装置及水平转子离心机

操作形式：离心柱式

处理时间：≤ 45 分钟

纯度指标：典型吸光度比值：260/280 ≥ 1.8，260/230 ≥ 2.0

推荐样本量：≤ 2.5 L

质粒大小范围：≤ 200 kb

得率：每次制备最高可达 3.0 mg。实际得率取决于质粒拷贝数、培养条件及所用大肠杆菌菌株。以高拷贝数质粒在LB培养基中过夜培养150 ml为例，典型得率为 600 – 1,200 µg。

三、产品优势

✅ 超高产量： 单次可获得高达 25 mg 质粒 DNA，拷贝数高的质粒于 150 ml 培养液中典型产量为 600–1200 µg。

✅ 超高速流程： ≤45 分钟即可完成高体积培养物的质粒制备。

✅ 无乙醇沉淀步骤： 直接柱结合与洗脱，减少操作时间与样品损失。

✅ 真空快速结合： 替代重力流柱，结合步骤更快，减少堵塞风险。

✅ 可视化缓冲液： 红色 P1（裂解前）、蓝色 P2（裂解液）、黄色 P3（中和液）直观确认反应完成程度。

✅ 超低内毒素： ≤0.025 EU/µg，满足转染及病毒生产需求。

✅ 高纯度高浓度： DNA 浓度最高可达 6 µg/µl，A260/A280 ≥1.8，A260/A230 ≥2.0。

✅ 兼容大型质粒： Zymo质粒超大提试剂盒可提取高达 200 kb 的 BAC/PAC 构建体。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 取 ≤2.5 L 大肠杆菌培养液，于真空系统连接 ZymoPURE Giga Filter 过滤浓缩菌体。

2. 加入 ZymoPURE P1（红色）进行裂解准备。

3. 加入 ZymoPURE P2（蓝色）进行裂解，直至混合液完全变为透明蓝色。

4. 加入 ZymoPURE P3（黄色）进行中和，产生黄色沉淀表明中和完成。

5. 将中和液加载至 Zymo-Spin VI-PX 柱，通过真空系统结合质粒 DNA。

6. 依次用 ZymoPURE Wash 1 和 ZymoPURE Wash 2 清洗去除杂质与内毒素。

7. 用 ZymoPURE Elution Buffer 洗脱质粒 DNA（推荐预热至 50°C 以提高大型质粒回收效率）。

五、注意事项

1. 设备要求： 真空泵（≥400 mm Hg）、真空歧管及摇篮式离心机。

2. 储存条件： 缓冲液及组件按说明书要求于室温或低温保存。P1 含 RNase A，建议存放于 4°C。

3. 适用范围： 适配多种革兰氏阴性细菌；革兰氏阳性需参考专用协议。

4. 高负荷样品处理： 高倍培养或过量菌体可能导致柱堵塞，应延长裂解时间并提前离心。

5. 安全警告： Zymo质粒超大提试剂盒仅限科研用途，不可用于诊断或治疗。

六、相关产品推荐

1.  ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit（货号：D4202，D4203）：高效快速提取高纯度转染级质粒DNA。

2. ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit（货号：D4200，D4201）:快速提取高浓度转染级中量质粒DNA。

3. ZymoPURE - Express Plasmid Midiprep Kit（货号：D4213）：无需离心收集菌体，15分钟快速纯化转染级质粒DNA。

4. ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit（货号：D4212，D4211，D4210，D4209，D4208T）：15分钟快速纯化高纯度无内毒素小提质粒。