一、基本信息

产品编号：E2001/E2002

核心特点：热启动、高效扩增、高特异性、兼容性广

产品描述：ZymoTaq™ DNA Polymerase是一种热激活的热启动DNA聚合酶，其试剂盒包含了进行热启动PCR所需的所有组分。该酶在室温下无活性，可有效减少引物二聚体和非特异性产物的形成。该产品特别针对亚硫酸氢盐处理的DNA进行甲基化检测的扩增而优化，同时也兼容基于SYBR Green或探针的实时荧光定量PCR。扩增产物具有3’末端转移酶活性，可产生“A”突出端，适用于TA克隆。

二、产品应用

ZymoTaq™ DNA Polymerase适用于多种PCR扩增应用。

△甲基化分析研究：专为高效扩增亚硫酸氢盐转化后的DNA而设计，是DNA甲基化检测的关键工具。

△实时/定量PCR：兼容基于SYBR Green染料或TaqMan探针的qPCR检测，可实现准确的定量分析。

△常规PCR扩增：适用于对特异性要求高的常规DNA扩增，能有效抑制非特异性扩增。

△TA克隆：其3’末端转移酶活性可在PCR产物末端添加“A”突出，便于直接连接至T载体。

三、产品优势

✅热启动特性：通过热激活机制，在室温配制反应体系时酶活性被抑制，从而显著降低非特异性扩增和引物二聚体的形成。

✅高扩增效率：针对复杂模板（如亚硫酸氢盐处理的DNA）具有优异的扩增能力，能获得稳定且产量高的目的片段。

✅卓越的特异性：优化的反应体系与热启动特性相结合，确保扩增反应具有高度的特异性，背景产物极少。

✅操作便捷：反应体系可在室温下快速配制，仅需在95°C孵育10分钟即可激活聚合酶，简化了实验流程。

✅广泛兼容性：与多种下游应用兼容，包括甲基化分析、实时定量PCR以及TA克隆，提供灵活的实验方案。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：于室温下，按照推荐反应体系将模板DNA、引物、2X反应缓冲液、dNTP混合液、ZymoTaq™ DNA聚合酶和无核酸酶水混合。

2. 热启动激活：将反应管置于PCR仪中，95°C孵育10分钟，以激活DNA聚合酶。

3. PCR循环：随后进行30-40个标准PCR循环，包括变性（94-96°C，30秒）、退火（温度依引物而定，30-40秒）和延伸（72°C，每1kb片段30-60秒）。

4. 最终延伸：所有循环结束后，在72°C进行7分钟的最终延伸，以确保产物完整性。

5. 反应终止与保存：将反应产物置于4°C保存或进行下游分析。

五、注意事项

1. 储存条件：所有组分应保存于-20°C，避免反复冻融以保证酶活性与试剂稳定性，长期保存可置于-80°C。

2. 体系优化：建议根据具体实验需求，对Mg²⁺浓度、引物浓度及模板用量进行优化。推荐反应体系中MgCl₂的终浓度为1.75 mM。

3. 引物设计：用于扩增亚硫酸氢盐处理DNA时，需遵循针对转化后序列的引物设计原则。

4. 模板质量：使用高质量、无污染的DNA模板，对于亚硫酸氢盐处理的DNA，建议使用经过纯化的完整转化产物。

5. 使用授权：请注意PCR技术受专利保护，使用本产品进行PCR不意味着获得相关专利的实施许可。

六、相关产品推荐

1. EZ DNA甲基化检测系列试剂盒：用于基因组DNA的亚硫酸氢盐转化与纯化，是进行DNA甲基化分析的前处理工具。

2. ZymoTaq™ PreMix（货号：E2003/E2004）：即用型2X预混PCR主反应液，包含除引物和模板外的所有组分，进一步简化实验操作。

3. Human Methylated & Non-Methylated (WGA) DNA Set（货号：D5013）：提供经过验证的甲基化与非甲基化DNA标准品，用于甲基化实验的对照与定量标准。

4. ChIP DNA Clean & Concentrator（货号：D5205/D5201）：用于高效纯化与浓缩染色质免疫沉淀后的DNA片段，适用于ChIP-qPCR等下游分析。