一、基本信息

产品名称：T4多核苷酸激酶

产品货号：M0201S / M0201L

规格：500units / 2500units

保存温度：-20°C

二、产品介绍

本产品为T4多核苷酸激酶，来源于携带克隆T4多核苷酸激酶基因的大肠杆菌菌株，经改良方法纯化。该酶能够催化ATP的γ-磷酸基团转移至DNA或RNA的5‘-羟基末端，实现磷酸化，同时具备去除3’-磷酸基团的活性，是分子克隆与核酸分析中的关键工具酶。

三、产品应用

T4多核苷酸激酶主要用于核酸的末端修饰与标记。

△5‘末端磷酸化：为寡核苷酸或DNA/RNA片段添加5’-磷酸基团，以用于后续的连接反应。

△末端标记：通过正向反应或交换反应，在DNA或RNA的5‘末端引入放射性或非放射性标记，适用于制备杂交探针或DNA测序。

△3‘磷酸去除：催化去除核酸3’末端的磷酸基团，用于特定的核酸修饰流程。

四、产品优势

✅高比活性：产品浓度高达10，000单位/ml，确保在标准反应条件下实现高效催化。

✅底物广泛：可作用于双链DNA、单链DNA及RNA等多种多核苷酸底物，应用范围广。

✅功能多样：兼具5‘末端磷酸化、末端标记和3’末端去磷酸化三种核心酶学功能。

✅严格质控：采用明确的单位定义（37°C下30分钟磷酸化20 pmol底物），保证批次间活性稳定。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：在冰上于适量的1X T4多核苷酸激酶反应缓冲液中，加入DNA/RNA底物、ATP及T4多核苷酸激酶。

2. 孵育反应：将反应体系置于37°C恒温设备中孵育适当时间（例如30分钟）。

3. 酶失活：反应结束后，可将反应管置于65°C水浴中加热20分钟以灭活激酶。

4. 产物纯化：根据后续实验需求，通过沉淀、柱纯化或凝胶电泳等方法分离纯化反应产物。

六、注意事项

1. 储存条件：本品及配套缓冲液需保存于-20°C，避免反复冻融以维持酶活性。

2. 反应条件：推荐使用配套的反应缓冲液（70 mM Tris-HCl， 10 mM MgCl2， 5 mM DTT， pH 7.6），并在37°C下进行反应。

3. 底物状态：磷酸化缺刻DNA的效率较低；进行末端标记时，可通过交换反应避免预先去磷酸化，但标记比活性可能降低。

4. 磷酸供体：除ATP外，dATP或dTTP也可作为磷酸基团供体，但使用非标准供体时需优化条件。

七、相关产品推荐

1. T4多核苷酸激酶反应缓冲液（货号：B0201S）