一、基本信息

产品名称：Vaccinia Capping System牛痘病毒加帽系统

产品货号：M2080S

规格：包含牛痘病毒加帽酶、加帽缓冲液、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）及GTP

保存温度：-20°C

二、产品介绍

本产品是基于牛痘病毒加帽酶（VCE）的酶促反应系统，专为在体外转录RNA的5'端高效添加7-甲基鸟苷酸帽（Cap-0）结构而设计。该帽结构对于mRNA在真核系统中的稳定性、转运及高效翻译至关重要。该系统提供了一种简便、高效的RNA加帽方案，适用于制备用于体外翻译、细胞转染及显微注射的高质量RNA。

三、产品应用

本牛痘病毒加帽系统主要用于为体外转录RNA添加5'端帽结构，以增强其稳定性和翻译效率。

△mRNA加帽：为体外转录的mRNA添加Cap-0结构，提升其在真核系统中的翻译活性。

△RNA标记：通过使用标记的GTP，实现对含有5'-三磷酸末端RNA的5'端标记。

△功能研究：制备带帽RNA，用于研究mRNA代谢、稳定性及翻译调控等过程。

△体外应用：为用于体外翻译系统、细胞转染或显微注射的RNA进行加帽修饰。

四、产品优势

✅高效加帽：催化效率高，可在1小时内近乎100%地完成RNA加帽，且帽结构方向正确。

✅功能完整：酶复合体包含RNA三磷酸酶、鸟苷基转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可一步生成完整的Cap-0结构。

✅高纯度：酶来源于重组表达系统，并经严格质控，确保无核酸内切酶、外切酶及核糖核酸酶污染。

✅应用灵活：兼容后续Cap-1修饰（需搭配mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶），可降低RNA在体内的免疫原性。

✅操作简便：提供即用型反应缓冲液及底物，简化实验流程。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 准备：将纯化的体外转录RNA溶解于无核酸酶、无EDTA、低盐的水中。

2. 混合：在反应管中依次加入RNA模板、加帽缓冲液、GTP、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）及牛痘病毒加帽酶。

3. 孵育：将反应体系置于37°C恒温设备中孵育反应，标准时间为60分钟。

4. 纯化：反应结束后，使用适当方法（如沉淀、柱纯化）纯化加帽后的RNA产物。

5. 分析：通过凝胶电泳、高效液相色谱或质谱等方法验证加帽效率及RNA完整性。

六、注意事项

1. RNA质量：用于加帽的RNA必须经过纯化，去除盐分及EDTA等可能抑制酶活的成分。

2. SAM稳定性：S-腺苷甲硫氨酸（SAM）在37°C及中性pH条件下不稳定，需临用前配制并避免反复冻融。

3. 结构干扰：对于5'端易形成二级结构的RNA，建议在加帽反应前进行短暂热变性处理。

4. 反应优化：对于加帽效率不高的RNA，可适当延长孵育时间至60分钟以提升效率。

5. 标记实验：若进行5'端标记，需调整反应中GTP与RNA的摩尔比例至1-3:1。

七、相关产品推荐

1. 鼠源RNase抑制剂（货号：M0314）

2. mRNA Cap 2‘-O-甲基转移酶（货号：M0366）

3. S-腺苷甲硫氨酸（SAM）（货号：B9003）

4. Faustovirus Capping Enzyme（货号：M2081）