一、基本信息

产品编号：12362/12381/12391

产品规格：12362适用于1-25 mg质粒DNA，12381适用于0.5-1 g质粒DNA，12391适用于1-5 g质粒DNA

核心特点：超低内毒素，高纯度，高产量，适用于转染

产品描述：EndoFree质粒纯化试剂盒系列基于专利的QIAGEN树脂技术，采用改良的碱性裂解结合硅胶膜吸附原理，旨在从细菌培养物中大规模纯化超螺旋质粒或Cosmid DNA。该系列通过优化的缓冲液系统有效去除内毒素（脂多糖），所获DNA适用于对转染效率要求苛刻的敏感真核细胞实验及基因治疗相关研究。

二、产品应用

EndoFree Plasmid Kits专为需要超低内毒素水平的高质量质粒DNA纯化而设计。

△高灵敏度细胞转染：为原代细胞、干细胞、神经元等敏感细胞的转染实验提供高纯度DNA，以最大化转染效率并降低细胞毒性。

△基因治疗研究：提供符合基因治疗载体制备要求的低内毒素质粒DNA，作为病毒包装或非病毒递送系统的关键起始材料。

△稳定细胞系构建：纯化所得的高质量DNA可用于通过转染和药物筛选建立长期表达的稳定细胞系。

△体外转录模板制备：获得的高纯度超螺旋质粒DNA可作为体外合成RNA（如mRNA、sgRNA）的优质模板。

三、产品优势

✅内毒素去除：通过专利的树脂结合与洗涤步骤，高效去除源于宿主菌的内毒素（LPS），内毒素水平极低。

✅高纯度DNA：基于碱性裂解与选择性吸附原理，有效去除蛋白质、基因组DNA、RNA及小分子杂质，获得高比例的超螺旋DNA。

✅高产量回收：优化的树脂载量与洗脱条件，确保从不同规模的细菌培养物中稳定回收高产量的质粒DNA。

✅操作流程可靠：提供标准化的缓冲液与预装柱，流程稳定，重复性好，最大程度减少操作差异对结果的影响。

✅严格质控：每批产品均经过严格的质量控制测试，确保性能稳定与批次间一致性。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 细菌收集与重悬：离心收集细菌沉淀，使用Buffer P1充分重悬菌体。

2. 细胞裂解：加入Buffer P2温和混匀以裂解细胞，溶液应变清亮。

3. 中和反应：加入预冷的Buffer P3并立即温和混匀，以中和裂解液并形成沉淀。

4. 澄清上清：将中和后的裂解液混合物通过QIAfilter柱过滤或离心，以去除沉淀物，收集澄清的裂解上清液。

5. 平衡与上样：使用Buffer QBT平衡QIAGEN-tip层析柱，然后将澄清上清液上样至柱中。

6. 洗涤杂质：依次使用Buffer QC和Buffer FWB2洗涤层析柱，以去除残留的杂质和内毒素。

7. DNA洗脱：使用Buffer QN将结合的质粒DNA从层析柱上洗脱下来。

8. DNA沉淀与溶解：向洗脱液中加入异丙醇沉淀DNA，离心后使用Buffer TE或无菌水溶解沉淀，获得纯化的质粒DNA。

五、注意事项

1. 存储条件：所有试剂盒组件建议在15-25°C干燥条件下储存，部分含RNase的缓冲液需冷藏。

2. 溶液配制：确保Buffer P1在加入RNase A后储存于2-8°C；用于沉淀的乙醇需使用试剂盒提供的无内毒素水新鲜配制为70%浓度。

3. 操作时效性：步骤2（加入Buffer P2）后的裂解反应不宜超过5分钟，应迅速进行步骤3的中和操作，以防质粒DNA损伤。

4. 内毒素控制：为维持极低的内毒素水平，实验过程中需使用无内毒素的耗材（如离心管、枪头）并避免环境污染。

5. 培养规模匹配：请根据目标DNA产量选择合适的试剂盒规格（Maxi, Mega, Giga）及对应的细菌培养体积，避免柱子过载或样品量不足。

六、相关产品推荐

1. QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit（货号：12943）：适用于快速纯化高达100 µg的高纯度质粒DNA，包含额外的基因组DNA去除柱。

2. QIAGEN Plasmid Maxi Kit（货号：12162）：适用于大规模纯化高达500 µg的高产量质粒DNA，适用于对常规内毒素水平不敏感的实验。