一、基本信息

产品编号：A0012-R1/A0012-R1-L

核心特点：高灵敏度、高特异性、强抗干扰能力、彩色视觉辅助

产品描述：本产品为2倍浓度的预混式SYBR Green I实时荧光定量PCR反应试剂，含有经特殊优化的热启动DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green I染料以及高浓度的ROX1被动参比染料和稳定的红色示踪染料。其配方旨在提供卓越的扩增效率、灵敏度和特异性，并可通过颜色变化为加样过程提供直观的视觉监控，有效降低操作误差。

二、产品应用

本产品适用于基于SYBR Green I染料法的实时荧光定量PCR实验，广泛用于基因表达分析、基因分型及病原体检测等领域。

△基因表达定量分析：用于准确测定不同样本中特定mRNA的转录水平。

△基因分型与突变检测：通过熔解曲线分析，鉴别基因序列的差异或多态性。

△病原体核酸检测：对病毒、细菌等病原体的核酸进行高灵敏度定性或定量检测。

三、产品优势

✅高效扩增：采用高性能热启动酶与优化缓冲体系，确保快速、高效的靶序列扩增，实现更低的Ct值。

✅卓越特异性：优化的反应条件与染料系统相结合，能有效减少非特异性扩增，熔解曲线呈现单一锐利峰形。

✅强健稳定性：配方具备良好的抗抑制剂能力，对样本中常见的杂质耐受性更高，结果更可靠。

✅操作便捷：预混了所有PCR核心组分，包括ROX校正染料，只需加入模板、引物和水即可完成体系配制。

✅彩色辅助：内含红色示踪染料，与配套彩色逆转录试剂生成的蓝色cDNA混合后变为紫色，提供直观的加样指示，防止遗漏或重复加样。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 试剂准备：将Master Mix从-20°C取出，室温静置或手握使其完全融化，轻柔颠倒混匀并短暂离心后置于冰上备用。

2. 模板稀释：建议将cDNA模板用无菌无核酸酶水进行5-10倍稀释并充分混匀，以提高实验重复性。

3. 体系配制：按照推荐比例，依次将Master Mix、正反向引物、稀释后的cDNA模板及补水至终体积的无核酸酶水加入反应管或孔板中。

4. 离心混匀：加样完成后密封反应容器，使用离心机以约1000×g离心1分钟，确保所有液体汇集于管底。

5. 上机运行：将反应板置于适用的实时荧光定量PCR仪中，运行标准的两步法扩增程序（通常为95°C 5分钟；随后95°C 10秒，60°C 30秒，循环40次），并采集荧光信号，最后运行仪器默认的熔解曲线分析程序。

五、注意事项

1. 引物验证：实验前需验证引物的特异性与效率，通过观察扩增曲线形状及熔解曲线是否为单峰进行判断。

2. 引物保存：经验证合格的引物应进行分装，并于-20°C或更低温度下保存，避免反复冻融导致降解。

3. 模板质量：RNA完整性及cDNA质量是影响qPCR结果的关键因素，应使用高质量的RNA样本，并尽快完成逆转录。cDNA如需长期保存，建议置于-80°C。

4. 试剂混匀：Master Mix融化后必须充分混匀，以确保各组分浓度均一，这对实验的重现性至关重要。

5. 程序设置：热启动酶活化步骤（95°C 5分钟）不可省略，且需在退火/延伸阶段设置荧光信号采集。

6. 仪器适配：本产品预混High ROX，适用于多数主流qPCR仪，若仪器不在适用列表，请选用不含ROX或含Low ROX的对应版本。

六、相关产品推荐

1. Color Reverse Transcription Kit（货号：A0010C/A0010CG/A0010CGQ）：配套彩色逆转录试剂盒，含蓝色示踪染料，用于将RNA模板逆转录为cDNA，与本产品联用可实现可视化的加样流程。

2. SYBR Green qPCR Master Mix (ROX2)（货号：A0012-R2）：预混Low ROX被动参比染料的预混试剂，适用于需低浓度ROX校正的特定qPCR仪器型号。