一、基本信息

产品编号：EZB-miProbe-R1-S / EZB-miProbe-R1

规格：200/500 Rxns

产品描述：本产品是一款专为探针法荧光定量PCR（qPCR）检测microRNA表达水平而设计的预混试剂。试剂盒包含通用型反向引物、荧光探针以及内参基因U6的qPCR正向引物，用户仅需自行设计并合成一条针对目标microRNA的正向引物即可完成检测。其核心组分2× EZ-Probe qPCR Master Mix for microRNA (ROX1 plus)整合了经化学修饰的热启动DNA聚合酶与优化的反应缓冲液，可有效抑制非特异性扩增，确保定量检测的准确性，并具备优异的特异性、灵敏度与重复性。

二、产品应用

本试剂盒适用于基于探针法的microRNA表达定量分析。

△基因表达分析：对特定microRNA在不同样本中的表达水平进行精确定量。

△功能研究：用于研究microRNA在细胞过程、疾病发生发展中的调控作用。

△生物标志物筛选：辅助发现与疾病诊断或预后相关的潜在microRNA标志物。

三、产品优势

✅预混便捷：试剂为2×预混液形式，用户只需加入模板、引物和水即可配制反应体系，简化操作步骤。

✅高特异性：采用化学法热启动DNA聚合酶与特异性探针，双重保障，有效减少引物二聚体和非特异性扩增。

✅广泛兼容：预混液中已添加ROX1校正染料，兼容包括ABI、Bio-Rad、Roche等主流品牌的多款荧光定量PCR仪。

✅灵敏度高：优化的缓冲体系与高效的酶促反应，能够对低丰度的microRNA实现稳定检测。

✅重复性佳：体系成分稳定均一，确保实验数据具有良好的孔间与批间重复性。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 试剂准备：将各组分从-20°C取出，完全融化并涡旋振荡混匀，短暂离心后置于冰上备用。

2. 体系配制：在无菌PCR管或板中，按推荐比例混合2× Master Mix、探针、通用引物、U6引物、自备的microRNA正向引物、模板cDNA及无核酸酶水。

3. 反应上机：将配好的反应体系充分混匀并离心后，转移至荧光定量PCR仪相应的样品孔中。

4. 程序运行：设置热启动酶活化、变性-退火/延伸循环以及荧光信号采集三步法标准程序，启动反应。

五、注意事项

1. 引物验证：实验前需对自行设计的microRNA正向引物进行验证，通过分析扩增曲线形态和Ct值评估其特异性与效率。

2. 组分保存：探针对光敏感，建议分装后于-80°C避光长期保存，避免反复冻融；其他组分于-20°C保存。

3. 模板质量：确保用于反转录的microRNA模板无降解，且合成的cDNA应避免反复冻融，以保证qPCR结果的可靠性。

4. 污染防控：操作过程中需使用无核酸酶耗材，并在专属区域进行，防止PCR产物或环境核酸污染。

六、相关产品推荐

1. EZ-press microRNA Purification Kit PLUS（货号：B0005-plus）：用于从多种样本类型中高效、特异地分离总RNA，富含microRNA。

2. EZ-press microRNA Reverse Transcription Kit（货号：EZB-miRT4）：采用Poly(A)加尾反应和逆转录反应同步进行的方法来进行microRNA cDNA第一链的合成，专为microRNA的反转录制备高质量cDNA模板。

3. EZ-press microRNA qPCR Kit (ROX1)（货号：EZB-miQP1）：基于嵌合荧光染料法的预混试剂盒，为microRNA定量提供另一种高性价比的检测方案。