一、基本信息

产品名称：2x Color SYBR Green qPCR Master Mix (ROX2)

品牌：EZBioscience

货号：A0012-R2/A0012-R2-L

规格：500次反应 (20 μl/反应) 或 2500次反应 (20 μl/反应)

产品组分：预混液包含热启动DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、SYBR Green I染料、低浓度ROX校正染料及专有红色示踪染料。

二、产品概述

本产品是一种即用型2x预混液，专为基于SYBR Green I染料法的实时荧光定量PCR（qPCR）实验设计。其核心成分为经化学修饰的热启动DNA聚合酶，配合高度优化的反应缓冲体系，确保了高扩增效率、强特异性与灵敏度。预混液中整合了低浓度ROX校正染料，适用于多种主流qPCR仪，并含有独特的红色示踪染料，可与配套的彩色逆转录试剂盒联用，通过颜色变化提供直观的加样指示。

三、产品应用

△基因表达分析：用于通过相对定量或绝对定量方法，精确检测不同样本中特定基因的mRNA表达水平。

△基因分型与突变检测：适用于基于熔解曲线分析（Melting Curve Analysis）的基因分型、SNP检测及PCR产物特异性验证。

△病原体检测：可用于病毒、细菌等病原体核酸的快速、高灵敏度检测与定量。

四、产品优势与特点

✅高扩增性能：采用热启动酶与优化缓冲体系，提供高扩增效率与强抗干扰能力，能获得更低的Ct值和更强的荧光信号。

✅卓越的特异性：通过熔解曲线单峰可明确验证扩增产物的单一性，确保实验结果的特异与可靠。

✅操作简便：预混了所有qPCR核心组分，仅需加入模板、引物和水即可完成体系配制，简化了操作流程。

✅视觉辅助加样：内含红色示踪染料，与配套蓝色cDNA混合后变为紫色，有效降低加样错误风险。

✅广泛的仪器兼容性：预混低浓度ROX染料，兼容ABI 7500、Bio-Rad CFX系列、Roche LightCycler 480等众多主流qPCR仪器平台。

五、使用说明（概述）

本产品适用于以cDNA为模板的qPCR反应。标准的20μl反应体系配制步骤如下：

1. 试剂准备：将Master Mix从-20°C取出，室温融化后充分颠倒混匀，短暂离心后置于冰上备用。

2. 体系配制：按照10μl Master Mix、0.4μl正向引物(10μM)、0.4μl反向引物(10μM)、适量模板cDNA，并用无菌ddH₂O补足至20μl的比例配制反应体系。

3. 混匀与离心：将反应液加入反应孔后，密封反应板，并于1000 rpm离心1分钟，使液体汇集于管底。

4. 上机运行：将反应板置于qPCR仪中，运行标准三步法程序：95°C 5分钟（热启动）；随后进行40个循环的95°C 10秒、60°C 30秒（于此步采集荧光信号）；最后运行仪器默认的熔解曲线分析程序。

六、注意事项

1. 保存条件：本品应置于-20°C避光保存，有效期24个月。使用前请充分融化并混匀。

2. 引物与模板质量：实验前需验证引物特异性，并确保使用高质量、无降解的RNA及cDNA模板。

3. 模板使用建议：为提高重复性，建议将cDNA模板进行适当稀释（如5-10倍）并混匀后使用。

4. 程序设置：热启动步骤（95°C 5分钟）为必需步骤，不可省略。荧光信号采集需设置在退火/延伸阶段。

5. 结果判读：有效数据需满足扩增曲线呈典型S型、熔解曲线为单峰、重复孔Ct值差异小于0.5，且内参基因Ct值处于合理范围（通常15-20之间）。

七、相关产品推荐

1. Color Reverse Transcription Kit (A0010CG/A0010CGQ)

2. 2x Color SYBR Green qPCR Master Mix (ROX1) (A0012-R1)